我们上面提到了反应的原理，由此我们可以简单的推断：温度作为变性-复性-延伸的基本设置，这个是我们需要校准的一个项目。
那么在反应的过程中，温度示值与设定值是否准确，我们需要知道。这是个温度示值误差；因为我们需要升温，降温，升温，这是不是涉及到一个速率的问题，升降温的快慢，pcr仪，会直接影响到整个反应过程，小型pcr仪，所以，升降温速率也是我们需要考量的一个方向。仪器通过加热模块去控制温度，在快速升降温的过程中，仪器不可避免的会先升高/降低温度之后，再达到所设定的问题，这就是温度的过冲，这也是可能也是一个考量的指标。达到一定的温度之后，仪器要平衡一段时间（所设定的时间），而温度平衡的时间和设置的时间，是否一致，也是要考虑的一个方向。不同的DNA模板，需要的温度和解链的时间不一样，如果解链的时间没达到要求，DNA没有完全变性，在降温复性的过程中，会恢复到天然的状态。
三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系。在PCR反应中，dNTP应为50-200μmol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等(等摩尔配制)，浓度过低又会降低PCR产物的产量。5.镁离子浓度Mg2+能与dNTP结合，Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响。在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为20μmol/L时，Mg2+浓度为1.5~2.0mmol/L为宜，Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增：浓度过低，会降低taqDNA聚合酶的活性，使反应产物减少。
稳定的温度
PCR扩增仪有各种形状和大小，有些比其他的更复杂，荧光定量pcr仪价格，然而，它们都执行相同的基本功能，pcr仪多少钱，温度循环。
PCR每个阶段的温度对反应的成功至关重要，因此，PCR扩增仪的温度在各孔之间和整个组之间准确和一致是至关重要的，这被称为均匀性。
为了确保每次使用PCR扩增仪时都有一致的结果，定期测试和校准温度块很重要。有经验的实验室科学家可以使用温度验证套件进行测试，但是任何重新校准都需要由合格的工程师来进行。
因此，强烈建议由合格的工程师定期对仪器进行维护和保养。这将保证PCR扩增仪保持在状态，并以状态工作。这些定期维护和校准活动的记录也将被要求用于实验室质量认证，如ISO17025。
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